СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ РАЗМНОЖЕНИЯ ВИНОГРАДА IN VITRO
Рубрики: БИОЛОГИЯ
Аннотация и ключевые слова
Аннотация (русский):
Аннотация. Цель исследования – совершенствование технологии размножения винограда культурного сорта Памяти Домбковской in vitro. Методы исследования. Были применены общепринятые в практике клонального микроразмножения растений методы: стерилизация исходного материала, введение в культуру, собственно клональное микроразмножение и укоренение in vitro с последующей адаптацией к условиям in vivo. Объектом исследования были микрочеренки винограда культурного сорта Памяти Домбковской. Закладку опытов проводили в трехкратной повторности, в одной повторности не менее 10 пробирок. Статистическая обработка полученных данных была проведена дисперсионным методом по Б. А. Доспехову. Учитывали следующие параметры: высота микропобегов и микросаженцев, количество листьев, коэффициент пролиферации. Развитие корней оценивали в баллах. Успешность адаптации рассматривали как процентное соотношение адаптированных микросаженцев к общему количеству высаженных в субстрат. На этапе адаптации была применена методика, разработанная и дополненная нами при клональном микроразмножении розы сорта Анжелика. Результаты. Установлено, что на питательной среде Мурасиге и Скуга (MS) с пониженным содержанием макроэлементов при введении в стерильную культуру invitro успешность приживаемости эксплантов составила 40,0 %. Определена оптимальная концентрация 6-бензиламинопурина (6-БАП) на этапе пролиферации 1,0 мг/л. При увеличении концентрации цитокинина 6-БАП до 2,0 и 3,0 мг/л отмечено снижение коэффициента пролиферации с 4,4 шт/черенок до 3,3 и 2,9 шт/черенок соответственно (НСР05 = 1,0). Выявлено, что наилучшей питательной средой для укоренения микрочеренков винограда является среда по прописи Зленко с соавторами, на которой достигается лучшее развитие микрорастений по таким морфометрическим показателям, как высота микропобегов, количество листьев и корневая система. На среде по рецептуре Зленко с соавторами высота микросаженцев была больше по сравнению с контролем на 4,3 мм при НСР05 = 2,7, количество листьев больше на 0,5 при НСР05 = 0,3, а корневая система микросаженцев развита лучше на 0,4 балла (НСР05 = 0,2). Научная новизна. Положительные результаты получены при выведении на адаптацию укорененных черенков винограда через 14 дней культивирования на среде для укоренения, что позволяет сократить продолжительность нахождения микрочеренков винограда в пробирке в 2–4 раза по сравнению с общепринятой методикой. Рекомендовано использование биологического препарата «Триходермавериде» для пролива почвенного субстрата с последующим опрыскиванием адаптируемых микросаженцев кремнийорганическим удобрением «Силиплант».

Ключевые слова:
виноград, клональное микроразмножение, пролиферация, питательная среда, гормоны, адаптация.
Текст
Текст произведения (PDF): Читать Скачать

Постановка проблемы (Introduction)

Виноград является новой интродуцируемой культурой для условий восточной части Нечерноземной полосы Российской Федерации. Основной способ размножения винограда – черенкование одревесневшими и зелеными черенками. Однако данный способ является малопродуктивным и не может удовлетворить все возрастающий спрос на посадочный материал. К тому же производство посадочного материала высшей категории в России отсутствует [1, с. 12]. Для обеспечения качественным посадочным материалом актуально использование клонального микроразмножения.

Клональное микроразмножение является новым перспективным способом вегетативного размножения растений, позволяющим за короткое время получать генетически однородный посадочный материал в большом количестве от одного исходного растения [2, с. 37], [3, с. 45]. Данный метод размножения имеет ряд преимуществ по сравнению с традиционными: ускорение перехода растений от ювенильной фазы развития к репродуктивной; получение генетически однородного посадочного материала, освобождение растений от различного рода заболеваний, высокий коэффициент размножения, возможность проведения работ в течение всего года [4], [5, с. 6], [6, с. 151]. Растения, полученные методом клонального микроразмножения, проходя путь от меристематических клеток до взрослых растений, подвергаются процессу реювенилизации (омоложения), в результате чего лишаются действия накопившейся «усталости» [7, с. 94]. В промышленном производстве плодово-ягодных, садовых и декоративных культур во всем мире в настоящее время наиболее перспективным методом размножения растений считается метод in vitro [8, с. 581].

Методология и методы исследования (Methods)

Исследования проводились на базе лаборатории Отдела интродукции и акклиматизации растений УдмФИЦ УрО РАН. В работе пользовались общепринятыми в практике клонального микроразмножения растений методами: стерилизация исходного материала, введение в культуру, собственно клональное микроразмножение и укоренение in vitro с последующей адаптацией к условиям in vivo [4].

Цель исследования – совершенствование технологии размножения винограда культурного сорта Памяти Домбковской in vitro.

Объектом исследования были микрочеренки винограда культурного сорта Памяти Домбковской. В качестве исходного материала для введения в стерильную культуру in vitro были взяты верхушки интенсивно растущих зеленых побегов винограда, которые разрезали на одноглазковые черенки c удаленными листовыми пластинками и промывали под проточной водой в течение получаса. Стерилизацию растительного материала проводили 33-процентным раствором перекиси водорода с экспозицией 5–7 минут с последующим 5-кратным промыванием стерильным дистиллятом. В качестве первичных эксплантов использовали апикальные меристемы, выделенные в стерильных условиях ламинар-бокса при 10-кратном увеличении. Растительный материал культивировали в условиях светоустановки при температуре +25 °С и 16-часовом фотопериоде. Закладку опытов проводили в трехкратной повторности, в одной повторности не менее 10 пробирок. Статистическая обработка полученных данных была проведена дисперсионным методом по Б. А. Доспехову [9].

Исследовали следующие параметры: высота микропобегов и микросаженцев (мм, измеряли с помощью линейки), количество листьев (шт.), коэффициент пролиферации (шт/черенок, учитывали как количество микропобегов, полученных от одного черенка). Качество корней оценивали в баллах при осмотре (от 1 до 3 баллов). 1 балл – это слаборазвитая корневая система, имеющая один основной корень не более 20 мм или 2–3 более коротких, боковых корней нет; 2 балла – среднеразвитая корневая система, основных корней 3–4 длиной 20–50 мм или один, но с хорошо развитыми боковыми и всасывающими корнями; 3 балла – хорошо развитая корневая система, основных корней 5 и более длиной 20–50 мм, часто с хорошо развитыми боковыми и всасывающими корнями [10, с. 104]. Успешность адаптации рассматривали как процентное соотношение адаптированных микросаженцев к общему количеству высаженных в субстрат. На этапе адаптации была применена методика, разработанная и дополненная нами при клональном микроразмножении розы сорта Анжелика [11, с. 242].

Результаты (Results)

Успех размножения in vitro во многом зависит от состава питательных сред, на которых будет развиваться эксплант, микрочеренок и микрорастение на всех этапах культивирования. Для введения в культуру апикальных меристем использовали твердые агаризованные питательные среды Мурасиге и Скуга с пониженным содержанием макроэлементов и модифицированную среду МS по Зленко с соавторами, содержание цитокинина 6-БАП 0,25 мг/л [12, с. 21].

Приживаемость на среде с пониженным содержанием макроэлементов была существенно выше (40 %) по сравнению с модифицированной средой МS по Зленко с соавторами (30 % при НСР05 = 1,3).

Таким образом, оптимальной средой для введения в культуру винограда оказалась среда с пониженным содержанием макроэлементов. Полученные результаты согласуются с нашими предыдущими данными по введению в стерильную культуру четырех сортов винограда, где оптимальной питательной средой также была среда с пониженным содержанием макроэлементов [13, с. 176], [14, с. 159].

На этапе пролиферации с целью получения максимального количества микропобегов провели исследования по выявлению наиболее эффективной концентрации 6-БАП, изучены варианты (мг/л): 1,0 (К), 2,0 и 3,0, основа – модифицированная среда МS по Зленко с соавторами (с повышенным содержанием СаCl2 – 650 мг/л). Учитывали такие параметры, как коэффициент пролиферации, длина микропобегов, витрификация и некроз побегов (таблица 1).

Таблица 1

Влияние концентрации 6-БАП на морфометрические параметры микрочеренков винограда на этапе пролиферации, 2016–2017 гг.

Концентрация

6-БАП, мг/л

Коэффициент пролиферации, шт/черенок

Длина побега, мм.,

Витрификация, %

Некроз, %

1,0 (К)

4,4 ± 0,7

17,6 ± 4,1

3,3 ± 3,3

26,7 ± 16,3

2,0

3,3 ± 0,8

13,3 ± 3,5

33,3 ± 4,2

40,0 ± 17,9

3,0

2,9 ± 0,9

11,4 ± 2,9

63,3 ± 3,3

13,3 ± 10,3

НСР05

1,0

4,2

10,5

17,9

Примечание: «±» – стандартное отклонение.

 

Table 1

Effect of 6-BAP concentration on morphometric parameters micro-transfers of grapes at the stage of proliferation, 2016–2017

Сoncentration of

6-BAP, mg/l

The ratio of proliferation, pcs/cuttings

The length of sprouts, mm

Vitrification, %

Necrosis, %

1.0 (С)

4.4 ± 0.7

17.6 ± 4.1

3.3 ± 3.3

26.7 ± 16.3

2.0

3.3 ± 0.8

13.3 ± 3.5

33.3 ± 4.2

40.0 ± 17.9

3.0

2.9 ± 0.9

11.4 ± 2.9

63.3 ± 3.3

13.3 ± 10.3

LSD05

1.0

4.2

10.5

17.9

Note: “±” is the standard deviation.

Как следует из данных, наиболее оптимальной для развития побегов была концентрация 6-БАП 1,0 мг/л, при которой был получен наибольший в опыте коэффициент пролиферации – 4,4 шт/черенок, на средах с содержанием цитокинина 2,0 и 3,0 мг/л данный показатель составлял соответственно 3,3 и 2,9 шт/черенок (при НСР05 = 1,0). Наши данные согласуются с результатами исследований, полученными Т. А. Красинской. При использовании 6-БАП в концентрациях 1,1, 1,5 и 2,0 мг/л отмечалось снижение коэффициента размножения с 4,4 до 3,8, а доля витрифицированных побегов, наоборот, возрастала с 1,8 до 29 % [15, с. 95]. Также среда МS с концентрацией 6-БАП 1,0 мг/л способствовала получению наилучших результатов по количеству побегов, длине побегов и количеству узлов. Для сорта Öküzgözü значения были 4,66, 1,24 и 6,39, сорта Boğazkere – 6,28, 1,15 и 6,81 соответственно [16, с. 55].

Синтетический цитокинин 6-БАП является универсальным, используется для размножения большого количества видов растений. По данным М. Монокари, при размножении Micrococca mercurialis (L.) Benth наибольший отклик (97 %) и количество побегов (4,2 побега/эксплант) наблюдали на среде МS, дополненной 1,0 мг/л 6-БАП [17, с. 39]. Для сортов роз плетистой группы Palais Royal, Camelot и Nahema на этапе пролиферации оптимальная концентрация цитокинина 6-БАП в составе питательной среды МS также была 1,0 мг/л [18, с. 385].

Средняя длина микропобега в контрольном варианте (1,0 мг/л) составляла 17,6 мм, что было существенно выше, чем на средах с цитокинином в концентрации 2,0 и 3,0 мг/л, где длина микропобегов была 13,3 и 11,4 мм соответственно (НСР05 = 4,2).

В контрольном варианте отмечали активный рост и формирование хорошо развитых боковых побегов. При дальнейшем увеличении концентрации 6-БАП до 3,0 мг/л наблюдали морфологические изменения побегов некроз верхушки, признаки витрификации.

В контрольном варианте доля витрифицированных микрочеренков составляла 3,3 %, при увеличении концентрации цитокинина до 2,0 и 3,0 мг/л данный показатель был существенно выше – 33,3 и 63,3 % соответственно (НСР05 = 10,5). Применение высоких концентраций регулятора роста цитокинина приводит к появлению такого нежелательного эффекта, как витрификация.

Витрификация (гипергидрация, стекловидность) – морфологическое отклонение микрорастений, которые теряют способность размножаться и акклиматизироваться. В таких случаях нарушается образование хлорофилла, протеинов, снижается жизнеспособность и приживаемость при пересадке; большинство растений гибнет. Один из возможных путей уменьшения оводненности – снижение концентрации цитокининов в среде и температуры культивирования [19, с. 70].

Некроз верхушки – отмирание апикальных участков тканей с изменением их окраски. Наибольшее количество побегов с некрозом верхушки отмечено при концентрации 6-БАП 2,0 мг/л (40 %), в контрольном варианте таких растений оказалось 26,7 %, при увеличении концентрации цитокинина до 3 мг/л их доля уменьшалась до 13,3 %, но различия были не существенными. В асептической культуре отмершие верхушки побегов и кончики корней является визуальным признаком недостатка кальция [5, с. 57].

Таким образом, оптимальной для этапа собственно микроразмножения винограда сорта Памяти Домбковской оказалась питательная среда с содержанием цитокинина 6-БАП в концентрации 1,0 мг/л.

На этапе укоренения использовали две рецептуры питательных сред: МS c половинной концентрацией макроэлементов и модифицированную МS по Зленко с соавторами, содержание ауксина индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) 0,2 мг/л [20, с. 215]. Был проведен учет начала корнеобразования (рис. 1).

Рис. 1. Корнеобразование микрочеренков Vitis vinifera L., 2016–2017 гг.

 

Fig. 1. Root formation of Vitis vinifera L. micro-gears, 2016–2017

 

Через 12 дней культивирования на среде по прописи Зленко с соавторами укоренилось 75,0 % черенков, на среде ½ МS – 41,7 %, через 16 дней – 100,0 и 83,3 % соответственно. Максимальное количество черенков укоренилось через 14–16 дней культивирования на питательных средах.

На рис. 2 представлен внешний вид микросаженцев, пригодных для высадки на адаптацию в почвосмесь.

 

а)

б)

в)

 

Рис. 2. Микросаженцы винограда сорта Памяти Домбковской перед высадкой на адаптацию. Продолжительность культивирования, дни:

а) 13; б) 33; в) 44

 

a)

b)

c)

 

Fig. 2. Micro seedlings of the Pamyati Dombkovskoy grape variety before planting for adaptation. Duration of cultivation, days:

a) 13; b) 33; c) 44

 

По истечении 60 дней культивирования на питательной среде для укоренения учитывали такие параметры, как высота побега, количество листовых пластинок, развитие корневой системы (таблица 2).

Таблица 2

Морфометрические показатели микросаженцев винограда на этапе укоренения, 2016 г.

Питательная среда

Высота побега, мм

Количество листьев, штук

Корневая система, баллы

½ МС (К)

54,6 ± 1,2

6,4 ± 0,1

2,4 ± 0,1

По Зленко и др.

58,9 ± 1,9

6,9 ± 0,2

2,8 ± 0,1

НСР05

2,7

0,3

0,2

 Примечание: «±» – стандартное отклонение.

 

Table 2

Morphometric indicators of grape microplants at the rooting stage, 2016

Nutrient medium

The height of the escape, mm

Number of leaves, pieces

The root system, the points

½ МS (С)

54.6 ± 1.2

6.4 ± 0.1

2.4 ± 0.1

According to Zlenko and other

58.9 ± 1.9

6.9 ± 0.2

2.8 ± 0.1

LSD05

2.7

0.3

0.2

Note: “± “ is the standard deviation.

 

Микросаженцы, выращенные на модифицированной среде MS по рецептуре Зленко с соавторами, имели значительно лучшие морфометрические показатели, такие как высота микропобегов, количество листьев и корневая система.

Адаптация растений-регенерантов к условиям in vivo является одним из самых ответственных и трудоемких этапов, который завершает весь процесс размножения in vitro. Для адаптации микросаженцев разными исследователями предложено множество вариантов почвосмесей. Нашими исследованиями по влиянию почвосмесей на успешность адаптации микросаженцев винограда и роз было выявлено, что лучшими являются субстраты, приготовленные на основе верхового торфа, обладающие оптимальным сочетанием агрофизических и химических свойств, в частности «Универсальная земля садовая» производства ЗАО «МНПП «ФАРТ».

Изначально адаптацию микросаженцев винограда после этапа укоренения проводили по методике, предложенной А. Б. Бургутиным (1991) в условиях пробирок [21, с. 220]. С тех пробирок, в которых микросаженцы достигали пробки, последние удаляли. Чтобы предотвратить появление плесени на агаризованной среде, 3–4 раза за 1,5–2 недели увлажняли поверхность агар-агара обычной водой. В конце этого периода верхушка растения и 1–2 развернутых листочка были вне пробирки. Посадку в почвенный субстрат проводили так, чтобы над поверхностью оставалась верхушка с 1–2 развернутыми листовыми пластинками. Однако данная схема укоренения микрочеренков, адаптации микросаженцев является продолжительной и трудоемкой, предполагает наличие теплицы.

Мы предлагаем начинать высадку на адаптацию саженцев винограда через 14 дней после посадки на укоренение, что позволяет сократить продолжительность нахождения черенков винограда на питательной среде в пробирке в 2–4 раза по сравнению с общепринятой методикой [22, с. 334].

После посадки черенков на питательную среду для укоренения уже через 10–14 дней культивирования корни достигают длины 10–15 мм без признаков ветвления. Надземная часть развита слабо: верхушечные черенки только начинают свой рост, на черенках из средней и нижней частей побега начинают просыпаться пазушные почки. По нашему мнению, очень важно уловить данный момент развития растений, так как относительно «старая» листовая поверхность в меньшей степени подвержена увяданию из-за потери тургора, корневая система справляется с влагообеспечением небольшой надземной части. Кроме этого, корни растений прямые, не загнуты, как это происходит при более длительном культивировании в условиях небольшого объема пробирок (рис. 2, б, в). Саженцы выборочно, аккуратно пинцетом вынимали из пробирок, корни промывали в децимолярном растворе марганцовокислого калия и высаживали в микропарник. На наш взгляд, промывание корней в растворе марганцовокислого калия от остатков агаризованной питательной среды в некоторой степени задерживает поражение пагубной микрофлорой.

Почвосмесь с посаженными саженцами проливали раствором «Триходерма вериде» согласно инструкции. «Триходерма вериде» относится к биологическим препаратам, представляет собой порошок, содержащий миллиарды сухих спор микрогрибка Trichoderma veride. Попадая во влажную и теплую среду (почву), они прорастают, размножаются и образуют невидимые глазу колонии. Этот вид грибка безвреден для растений, поскольку не питается их живыми тканями [23].

В предыдущих наших исследованиях было выявлено существенное увеличение количества адаптированных саженцев роз сорта Анжелика при внекорневой обработке препаратом «Силиплант» [11, с. 242]. Растения обильно однократно опрыскивали раствором «Силипланта» (1,5 мл/л). «Силиплант» – кремнийсодержащий препарат, в состав которого, кроме кремния (7 %) и калия (1 %), входят в легкодоступной для растений хелатной форме следующие микроэлементы: железо, медь, цинк, марганец, кобальт, бор. Удобрение разработано, зарегистрировано и производится ННПП «НЭСТ М». Препарат стимулирует развитие корневой и надземной частей, снимает различные стрессы, активирует фотосинтез. Усиливает механическую прочность клеточных стенок, обладает ярко выраженным фунгицидным действием, стерилизующим споры грибов. В дальнейшем влажность в микропарниках поддерживали путем ежедневного опрыскивания водопроводной водой саженцев и крышки микропарника из пульверизатора. При такой технологии адаптации нами была получена 100-процентная приживаемость микросаженцев винограда. После периода адаптации растения были высажены на доращивание в отдельные контейнеры.

Обсуждение и выводы (Discussion and conclusion)

Таким образом, на основании наших исследований по клональному микроразмножению Vitis vinifera L. сорта Памяти Домбковской можно сделать следующие выводы:

1. Оптимальной средой для введения в культуру винограда является среда Мурасиге и Скуга с пониженным содержанием макроэлементов (приживаемость эксплантов – 40 %).

2. На этапе микроразмножения для роста и развития побегов целесообразно использовать питательную среду с содержанием цитокинина 6-БАП в концентрации 1,0 мг/л.

3. Питательная среда для укоренения по рецептуре Зленко с соавторами способствует лучшему развитию микрорастений.

4. С целью повышения эффективности клонального микроразмножения выведение на адаптацию пробирочных растений следует производить через две недели культивирования in vitro на среде для укоренения, что позволяет сократить продолжительность ризогенеза в 2–4 раза по сравнению с общепринятой методикой с сохранением высокой приживаемости растений (до 100 %).

Список литературы

1. Батукаев А. А., Батукаев М. С., Палаева Д. О. Использование регуляторов роста при размножении винограда методом in vitro // Биология клеток растений in vitro и биотехнология: тезисы докладов XI Международной конференции, которая знаменует полувековую историю по исследованию культивируемых in vitro клеток высших растений и 60-летие деятельности отдела биохимии и биотехнологии растений государственного научного учреждения «Центральный ботанический сад НАН Беларуси». Минск, 2018. С. 12-13.

2. Митрофанова И. В., Митрофанова О. В., Браилко В. А., Лесникова-Седошенко Н. П. Биотехнологические и физиологические особенности культивирования in vitro ценных генотипов розы эфирномасличной // Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. 2015. № 2 (13). С. 37-48.

3. Егорова Н. А., Ставцева И. В. Микроразмножение сортов эфирномасличной розы в культуре // Вестник Удмуртского университета. Серия Биология. Науки о Земле. 2016. Т. 26. Вып. 2. С. 45-52.

4. Бутенко Р. Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе: учебное пособие. М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. 160 с.

5. Черевченко Т. М., Лаврентьева А. Н., Иванников Р. В. Биотехнология тропических и субтропических растений in vitro. Киев: Наукова думка, 2008. 560 с.

6. Акшикова Н. А. Введение в культуру in vitro хосты (Hosta) для декоративного озеленения садов и парков // Международный журнал гуманитарных и естественных наук. 2018. № 11-1. С. 150-153. DOI:https://doi.org/10.24411/2500-1000-2018-10173.

7. Леконцева Т. Г., Худякова А. В., Федоров А. В. Адаптация микросаженцев плетистых роз сортов Polais Royal, Camelot и Nahema // Инновационные технологии в полевом и декоративном растениеводстве: сборник статей по материалам II Всероссийской (национальной) научно-практической конференции. Курган, 2018. С. 93-96.

8. Милехин А. В., Рубцов С. Л., Мадякин Е. В. Модель регионального базового центра по оздоровлению микроклональному размножению сельскохозяйственных растений in vitro // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. 2015. Т. 17. № 4 (3). С. 581-584.

9. Доспехов Б. А. Методика полевого опыта. Москва: Колос, 1968. 336 с.

10. Маркова М. Г., Сомова Е. Н., Потапова С. А. Влияние регуляторов роста на размножение перспективных сортов малины в культуре in vitro // Вестник Донского государственного аграрного университета. 2015. № 2-1 (16). С. 104-111.

11. Леконцева Т. Г., Худякова А. В., Исаева А. Н., Федоров А. В. Оптимизация некоторых этапов микроклонального размножения чайно-гибридной розы «Анжелика» // Вестник Пермского университета. Биология. 2017. Вып. 3. С. 240-244.

12. Зленко В. А., Котиков И. В., Трошин Л. П. Размножение оздоровленного посадочного материала винограда в культуре in vitro // Садоводство и виноградарство. 2005. № 1. С. 21-23.

13. Федоров А. В., Леконцева Т. Г. Влияние состава питательной среды на приживаемость эксплантов винограда (Vitis vinifera L.) на этапе введения в культуру in vitro // Агрохимия в Предуралье: история и современность: Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 55-летию кафедры агрохимии и почвоведения ФГБОУ ВПО Ижевская ГСХА, 2012. С. 173-177.

14. Федоров А. В., Леконцева Т. Г. Использование биотехнологических методов получения саженцев винограда в питомниководстве Среднего Предуралья // Состояние и перспективы развития северного садоводства: материалы научно-практической конференции, посвященной 80-летию со дня основания Свердловской селекционной станции садоводства. Екатеринбург, 2015. С. 158-166.

15. Красинская Т. А., Змушко А. А. Морфогенез растений-регенерантов сортов винограда в культуре in vitro при использовании биологически активных веществ синтетического происхождения // Журнал белорусского государственного университета. Биология. 2018. № 2. С. 95-104.

16. Yildirim H., Ozdemir G. Influence of BAP concentrations and nutrient medium composition on in vitro regeneration of “Öküzgözü” and “Boğazkere” (Vitis vinifera L.) cultivars // Erwerbs-Obstbau. 2018. T. 60. No. 2. Pp. 55-59. DOI:https://doi.org/10.1007/s10341-018-0393-7.

17. Manokari M., Shekhawat M. S. Optimization of in vitro and ex vitro regeneration and micromorphological studies of Micrococca mercurialis (L.) Benth // Botanica Pacifica. A journal of plant science and conservation. 2017. No. 6 (1). Pp. 37-44. DOI:https://doi.org/10.17581/bp.2017.06105.

18. Lekontseva T., Fedorov A., Khudyakova A. Biotechnology as a heart of innovation in nursery management of ornamental plants [e-resource] // Digital agriculture - Development Strategy: proceedings of the International Scientific and Practical Conference (ISPC 2019). Series: Advances in Intelligent Systems Research. Ekaterinburg, 2019. Vol. 167. Pp. 385-388. URL: https://www.atlantis-press.com/proceedings/ispc-19/125909488 (appeal date: 20.01 2020). DOI:https://doi.org/10.2991/ispc-19.2019.64.

19. Князьков И. Е., Сахно О. Н. Клеточная инженерия растений: учебное пособие. Владимир: Аркаим, 2016. 84 с.

20. Исаева А. Н., Леконцева Т. Г., Федоров А. В. Оптимизация технологических приемов размножения Vitis vinifera L. в культуре in vitro при интродукции в условиях Среднего Предуралья // Роль ботанических садов и дендрариев в сохранении, изучении и устойчивом использовании разнообразия растительного мира: материалы Международной научной конференции, посвященной 85-летию Центрального ботанического сада Национальной академии наук Беларуси. Минск, 2017. Ч. 2. С. 213-217.

21. Бургутин А. Б. Микроклональное размножение винограда. Биология культивируемых клеток и биотехнология растений: сборник статей. М.: Наука, 1991. С. 216-220.

22. Исаева А. Н., Леконцева Т. Г., Федоров А. В. Перспективы биотехнологического метода при интродукции Vitis vinifera L. в Удмуртской Республике // Современные тенденции сохранения, восстановления и обогащения фиторазнообразия ботанических садов и дендропарков: Международная научная конференция, посвященная 70-летию дендрологического парка «Александрия» как научного учреждения НАН Украины. Белая Церковь, 2016. С. 333-335.

23. Триходерма вериде: инструкция по применению [Электронный ресурс]. URL: https://sotkiradosti.ru/v-pomoshh-rasteniyam/trihoderma-veride-instruktsiya-po-primeneniyu (дата обращения: 16.01.2020).

Войти или Создать
* Забыли пароль?